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细胞因子检测的方法有哪几种?
2024-06-25 16:14:45 作者: 高思维医疗 896

细胞因子(cytokine,CK)是由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。它们通过结合相应受体,调节细胞生长、分化和效应,调控免疫应答。它们通常在免疫原、丝裂原或其他刺激剂的作用下产生,并具有多种功能,包括调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、APSC多能细胞以及损伤组织修复等。根据其功能和特性,细胞因子可被分为不同的家族,如白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子和生长因子等。细胞因子在人体内发挥着重要的调节作用,对于维持身体健康和预防疾病具有重要意义。

目前细胞因子检测方法包括:酶联免疫吸附测定(ELISA)、分子生物学测定法等。


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1、酶联免疫吸附法(ELISA)

酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常用的免疫学检测方法,利用抗原抗体特异性结合原理,将抗体固定在ELISA反应板表面,加入含有抗原的待检测样本进行结合,再加入有酶标记的抗体,Z后加入显影底物,采用比色的方法量化目标分子。可用于检测和定量生物样本种的微量物质,特别是细胞因子等蛋白质。


该方法可以用于检测细胞因子的含量、细胞因子的亚型、细胞因子的受体等,也可用于检测细胞因子的分泌和细胞因子的功能研究。ELISA试剂盒因为操作简单,不需要特别昂贵的设备即可在实验室开展,颇受科研人员欢迎。随着科研水平的提高,由于每种ELISA试剂盒只能测定单一目标分子,当用户想研究多个蛋白表达情况时,需购买多种试剂盒才能满足需求,为了解决多次实验过程中备受诟病的洗涤、拍板带来的耗时、费力问题,科研人员可通过使用洗板机(Bio-Rad,Model 1575 Immunowash Microplate Washer #1707009)解放双手以更好的完成检测。


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2、蛋白质印迹法(Western Blot,WB)

蛋白质印迹法(Western Blot)是一种常用的分子生物学实验方法,用于检测细胞或组织中特定蛋白质的表达情况。该方法的基本原理通过凝胶分离蛋白后转印到载体膜上,然后通过特异性抗体去识别目标蛋白,Z后根据显影的灰度值或者荧光值分析蛋白量的表达,获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况。


蛋白质印迹法的步骤包括:电泳分离、转膜、免疫印迹、显色等。该方法可以用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。目前常见的检测方式有化学发光和荧光两种方式,以此来满足用户的多种需求。


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3、液相芯片检测技术

液相芯片技术是基于流式细胞术的原理来检测蛋白的一种方法, 带有磁性的聚苯乙烯微球中含有两种或者三种荧光染料,通过荧光配比的不同可以分为几百种不同的微球,分别标记不同的编码。每种编码微球偶联有不同蛋白的抗体,用于捕获抗原,之后加入藻红蛋白(PE)标记的抗体,Z后上机完成检测。每种微球可以用来检测一种蛋白,当将多种微球混合在一起时,便可同时检测不同蛋白。上机时要求配备液相芯片系统,仪器通过红色激光(635 nm)分类不同编码的微球,确定每个编码微球对应的靶标名称,以定性是哪种蛋白或者核酸,再通过绿色激光(532 nm)检测PE荧光强度,用于定量蛋白或者核酸。


Bio-plex 200(Bio-rad,Bio-Plex® 200 System With HTF #171000205)基于液相芯片技术研发了许多试剂盒,常见的试剂盒适用于多个物种,如:人类、非人灵长类、小鼠、大鼠等,还可根据用户需求定制不同的试剂盒。


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4、Simoa技术(Simoa)

Simoa技术是基于微阵列芯片的单分子免疫检测,其主要应用领域包括肿瘤,神经、感染性疾病和免疫炎症等,目前在全球引用该技术发表的文献有200篇左右,包括高分杂志Nature, Nature Biotechnology, JEM, JAMA Neurology等。Simoa技术的关键在于将免疫复合物捕获并密封在一个含有超过20万个飞升级别小孔的芯片中反应,大幅提升检测灵敏度。故Simoa又称作数字式ELISA,它的检测灵敏度比传统的免疫检测技术平均高1000倍以上。可对传统方法无法检测到的低浓度生物标志物进行准确分析,为生命科学研究、体外诊断、伴随诊断和血液筛查等领域开创了新的研究前景。


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