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在蛋白质印迹(WB)实验中,什么样的条带可以用,业内没有一个很明确的标准,大概老板对你的要求可能是这样的:
1、清晰且锐利的条带:条带边缘清晰,没有明显的弥散或模糊,这表明蛋白分离和转移效果较好。
2、与预期分子量相对应的条带:条带的位置应与目标蛋白的理论分子量相符,或者在合理的误差范围内。
3、强度适中的条带:条带的信号强度既不过强导致饱和,也不过弱难以检测。合适的强度有助于准确的定量和分析。
4、特异性条带:条带应该是特异性针对目标蛋白的,没有明显的非特异性杂带或背景干扰。
5、可重复性条带:在相同实验条件下的重复实验中能够稳定出现的条带,表明实验结果具有可靠性。
思路:
NLRP3炎症体活性失调与多种慢性疾病相关。线粒体损伤对NLRP3炎症体激活至关重要,但其激活机制不明。通过实验发现,Toll样受体(TLRs)激活后诱导的mtDNA合成对NLRP3信号传导至关重要。TLRs通过MyD88和TRIF适配子激活IRF1,IRF1进一步触发CMPK2的转录,CMPK2是mtDNA合成的关键酶。CMPK2催化dCMP磷酸化为dCDP,进而转化为dCTP,为mtDNA合成提供必需的dNTP。
实验证明,CMPK2依赖的mtDNA合成是产生氧化mtDNA片段的前提,这些片段与NLRP3炎症体复合体结合并激活之。利用IRF1基因敲除小鼠模型,证实了IRF1在体内NLRP3炎症体激活中的必要性。
揭示了新合成的mtDNA如何与NLRP3炎症体复合体相互作用,并提出新合成的mtDNA由于其未被TFAM高度压缩,更易被氧化,从而产生激活NLRP3炎症体的氧化mtDNA片段。由于CMPK2的催化活性对NLRP3炎症体激活至关重要,提出了通过调节CMPK2活性来控制NLRP3相关疾病的可能性。顶刊思路是重中之重,层层递进的思路,甚是精彩。
另个顶刊的WB,还有这样的
看到这些内参条带时,是不是激发了一种自信和动力?感觉自己的技能也不搓啊。这种正面的比较有时可以激励我们更加努力地工作,甚至可能让我们相信我们的结果在某种程度上可以超越已经发表的研究,但同时也需要保持客观和批判性思维,确保我们的实验设计和数据分析都是严谨和准确的。
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