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秋季实验室又迎来了一波实验新(sha)手,每年的迎新,都让师兄师姐们百感交集,恨不得把注意事项贴遍实验室,新人实验时也总是提心吊胆,生怕会出什么问题。你是否曾经被新来的萌新深深坑到惨,我们集锦了生物实验必背知识点。
一、PCR 扩增目的基因
问:第一次带师弟做 PCR,准备扩一段目的基因,师弟熟门熟路地从移液器支架上取下了 2.5μL 和 100μL 的 research plus 放到了桌上躺平。那一刻内心强烈 OS:我那宝贵的枪是你能随便躺平的吗?
实验 Tips:
(1)使用移液器前,先准备好所有实验材料,PCR 实验需要低温,因此务必将模板、酶等实验材料在冰上操作;
(2)使用移液枪时选择带滤芯的枪头,防止交叉污染;
(3)如果退火温度尚未确定,试试在 Tm 值附近 5℃ 的范围,温度由高到低进行测试,即可以估算出Z佳退火温度。
Eppendorf Mastercycler X50 PCR 热循环仪有 2-D 梯度技术,可一步完成高级 PCR 优化,同时快速确定Z佳产率和特异性条件,赶紧去实验室探索下这台「神器」,如果有,你未来的漫漫实验之路就能轻松很多。
二、感受态细胞制备
问:有一次,我带师妹做感受态细胞,师妹说她知道感受态细胞,但她一直是购买的商品化的 DH5α 感受态细胞,看来是不知道有些实验室感受态是自己制备的。
实验 Tips:
(1)要密切关注细菌的生长状态,多次转接或者储存于 4℃ 的细菌就不要用啦;
(2)操作在冰上进行且保证环境无菌,记住感受态细胞是很脆弱的,用枪吹打时要温柔的对待它哦;
(3)提前预冷离心机,否则临到使用再打开的话,又要白白浪费宝贵的实验时间了。
Eppendorf 5425 R 冷冻离心机,在 8 分钟内即可完成预冷进入工作状态(21 °C 至 4 °C),1/4 圈快速开/关盖,操作巨简单!快找到实验室的冷冻离心机,贴上提醒预冷的标签吧。
三、细胞培养
问:实验室细胞房一直很干净,可是上次来新人后,细胞培养箱里面菌落养的比细胞还要好
实验 Tips:
(1)细胞房的规范不仅要贴在墙上更要记在心里,规范的管理才有可靠的实验哦;
(2)超净台/生物安全柜内的设备和耗材务必合理分区,避免混乱造成不必要的污染;
(3)需要无菌操作的步骤要尤其注意,酒精千万不能省;
(4)二氧化碳培养箱需要定期清洁和高温消毒,其次向培养箱承液盘里加入的液体一定要保证是无菌。
Eppendorf C170i 二氧化碳培养箱,有效帮助避免细胞污染。箱体无死角,全部结构支持快拆,自带 180℃ 高温消毒系统。不用总是担心细胞污染啦,定期清洁,实验无忧。
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