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Bio-Rad着力于提供完整的实验室分子生物学解决方案,具备一系列专为蛋白、核酸及其他样品成像所设计的产品(如下),包括直观的数据采集设备和分析软件。所有图像分析软件均采用imagelab软件进行分析,该软件具备强大的分析功能,可不限次安装于个人电脑进行数据分析及导出。
软件安装成功后,可以对Bio-Rad成像仪采集的图像进行泳道、条带、灰度值、分子量、相对表达量等进行分析,使用教程如下:
一、双击打开ImageLab软件,导入要分析的样本图像。
在图像工具里可对当前图像进行水平垂直方向的翻转,另外如果样品在拍摄时有摆放不正的现象,也可通过“自定义”功能进行旋转,当图像上出现红色十字标记时,右键点选“旋转”即可完成。此外还可根据情况使用“剪切”功能去除不需要分析的区域,使用“合并”功能对同时打开的两张图像进行叠加合并等。
二、“泳道和条带”工具用于对当前图像上的信息进行识别。点击“泳道—自动”,软件自动完成所有泳道的检测。如需调整,也可采用“手动”功能获取泳道信息。
在“条带”检测工具下,可自行设定检测灵敏度以识别图像上的条带。同时也可手动添加或删除某个条带。
三、“MW分析工具”能通过已知的标准品分子量信息检测未知样品中各条带的分子量信息。点击“更改”,显示“管理标准”窗口,选定maker信息,同时在图片上勾选相应泳道,打开分析表,即可显示所有条带的分子量信息。
四、“定量工具”可选定某一个条带为对照,展示其他条带相比于对照的表达量变化情况,如下图,选定的条带上会显示绿色的“R”,打开分析表,“相对定量”列里可显示不同的表达信息。此外也可根据标准品信息进行绝对定量。
五、对于western blot结果的定量通常用到“体积工具”。点选“矩形工具”,在western blot图像上选定条带范围,图像上显示选择框,用复制粘贴的方式复制多个选择框,并将其拖拽到不同条带位置处(如下图)。双击图像上的对照条带,选取“参考体积”,打开“分析表”,列表中显示所有条带的相对定量数值,可将此分析表导出到Excel表格进行后续数据的分析。
六、此外,ImageLab还具备独有的western blot结果计算方式,该方式以泳道总蛋白质表达量为内参,不用再对看家蛋白进行分析,不仅是对western blot实验过程的简化,实验数据的分析也更为便捷。创建多通道图像,同时打开总蛋白质图及目标蛋白blot图,在软件上选取总蛋白图(图示为Stain Free Blot)为参照通道,同时选取相应泳道为参照泳道。软件自动分析两张图上的泳道及条带灰度值(图示为调整泳道总体积)。点击分析表,展示每条泳道的归一化因子。该因子代表不同泳道上样量的差异。Z终以目标蛋白各个泳道调整泳道总体积乘该泳道归一化因子即为该蛋白的Z终表达情况。只需简单几步操作即可获得western blotZ终数据结果。
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