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第三代PCR技术,数字PCR是真正的绝对定量技术。其生化反应原理与实时定量PCR相同,但是它的扩增过程是将一个反应划分为成千上万个并行的反应单元分开进行,即微分化反应体系,这极大地避免了PCR抑制剂的干扰及相似模板之间的竞争性抑制,使检测的性得到更进一步的提升。
Bio-rad微分化过程采用专有的微流控技术形成油包水微滴,将一份样品分成数万个纳升级的微滴,核酸分子在各微滴中随机分装,每个微滴或不含待检核酸靶分子,或者含有至少一个待检核酸靶分子,且每个微滴都是一个独立的 PCR 反应器。经 PCR 扩增后,微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测,判定其阴阳性,Z终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例,分析软件可直接给出待检靶分子的拷贝数浓度。
如此检测方式大大提高了核酸序列检测的灵敏度和精准度,由于扩增前的微滴化处理步骤,使得该技术能够以绝对定量的方式直接“数”出靶分子的个数,从而实现绝对定量分析。该技术在肿瘤液体活检、无创产前筛查、病毒载量分析,以及单细胞转录本定量等领域具有广泛的应用前景。
一、BIO-RAD数字PCR设备
BIO-RAD在数字PCR领域耕耘多年,设备装机量及文献发表量众多。具有满足不同通道数、样本量及自动化程度的多款设备型号。
QX600微滴式数字PCR系统可提供先进的六色多重技术,具备极高准确度、重现性和灵敏度。应用于稀有突变检测、基因表达分析、基因组编辑检测、拷贝数变异分析、多重突变筛选、病毒滴度定量、污染测试,以及病原体检测等。
特点:
1、灵敏的多重检测
(1)六色检测通道(FAM、HEX、Cy5、Cy5.5、ROX和ATTO 590)
(2)单孔中可定量多达12个靶标
(3)0.1% 或更高灵敏度的绝对定量方法
2、准确且可重现的结果
(1)系统经过澳大利亚国家计量研究院(NMI)标准认证,结果可信度高
3、功能强大的软件
(1)用户友好型软件
(2)高级版软件具有符合美国FDA 21 CFR第11部分规定的审计跟踪和工具
(3)全系列兼容
(4)兼容TaqMan和EvaGreen染料法
(5)可与QX200检测试剂和耗材兼容
(6)可在现有ddPCR检测试剂的基础上进行扩展检测
二、QX200 ddPCR系统
两通道微滴式数字 PCR系统,采用 EvaGreen 或 TaqMan 水解探针,可对靶 DNA 或 RNA 分子进行绝对定量分析。它具有无与伦比的灵敏度和精确度,适用于多种应用。
特点:
(1)Z准确、Z灵敏的数字 PCR 解决方案,具有广泛的应用
(2)灵活的数字 PCR 化学方法,已针对 TaqMan 水解探针和 EvaGreen 测定进行优化
(3)灵活的测定设置,可通过扩展实现高度的灵敏性或较大的通量
(4)简便而易用的工作流程,通量达 96 个样品
(5)QX200 Droplet Digital 技术的微滴划分功能可减少扩增效率和 PCR 抑制剂的影响
(6)便捷的测定设计,不需要标准曲线
三、AutoDG 全自动微滴发生器
AutoDG 全自动微滴发生器可配合QX200或QX600 微滴分析仪进行实验,提供自动化高通量的微滴生成。
特点:
(1)简化了 ddPCR 工作流程
(2)Z大限度减少手工操作步骤
(3)消除不同实验人员之间的操作差异
(4)30 分钟内完成 96 个样品的微滴生成
(5)灵活的反应板设置(每 8 孔递增)
(6)彩色触摸屏方式编程
(7)HEPA 过滤,减少污染
四、全自动微滴式数字 PCR
全自动微滴式数字 PCR :QX ONE ddPCR 系统将标准 ddPCR 工作流(微滴生成、热循环和微滴读取)无缝集成到一个仪器中,全程无人值守。
特点:
1、高通量
(1)自动化、无人值守的操作
(2)完全集成的仪器和耗材,微滴生成、微滴 PCR 和数据读取在一块 96 孔板中进行
(3)多板装载能力,可随时装板,可连续运行
(4)仪器试剂用量监控,可运行中更换
2、高阶多重功能
(1)四色高阶多重检测与分析功能
(2)ddPCR 多重预混液
3、无缝整合
(1)兼容现有的Bio-Rad ddPCR 预混液和检测试剂盒
(2)兼容探针法 PCR 实验
(3)软件有符合美国FDA 21 CFR Part 11合规操作的安全版