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实验室有用于培养细胞的超净台,内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下,目的是消毒,减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度,因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多,又如何达到消毒的目的呢?在网上搜索后找到一些资料,认为不应在超净台内使用火焰。
一、那么超净台和安全柜内到底应不应该有酒精灯。
1、超净台正方观点:
支持方理由如下:无菌是分等级的,超净工作台一般可以达到局部百级,不是完全无菌无尘,且紫外线台内不能100%的消灭微生物。而酒精灯周围10cm处可以形成一个天然无菌区,是对局部无菌环境的更进一步保障。酒精灯有上升气流,可以使其附近大约10cm处的范围内,没有灰尘落下,开启的瓶盖放置在此区域,就算是暴露状态下,也不用太担心灰尘掉落的问题。
培养的试剂,有时不是一次就用完的,需要放置在非无菌环境的冰箱里保存,这过程难免会导致瓶身、瓶口附近附着细菌、灰尘。尽管带入超净台内都会用酒精喷洒,但酒精仍然无法完全灭菌和除尘。其实细菌自己是不会跑的(跑得太慢了),所以细菌的移动不是随着气流,就随着液流,我们适当灼烧瓶口等有液流的地方,使其干燥,就产生了相当于“局部固定”细菌或灰尘的作用,就减少了它们随液流扩散的可能性。
很多单位超净工作台,并没有定期检查维护(达不到国外发达国家的条件),Z多也就是定期更换滤网,但是否更换滤网之前,其除菌除尘效果已经早就不达标了也不得知,此时在关键操作环节置于酒精灯附近操作,是更有保障的。超净台内的酒精灯是不会影响超净台的层流除菌除尘效果的,酒精灯局部的气流范围本身是无菌无尘的,那些看不见的被酒精灯“赶跑”的细菌灰尘,会进入附近超净台提供的层流里,被排出工作台外。
关于安全问题,酒精灯虽然是明火,正确使用下已经算是很安全的了。不要在酒精瓶身、手套沾有未干的酒精情况下去点灯;不要使酒精灯瓶内的酒精过多或过少;不要使酒精灯倾倒;不要加热易燃易爆炸物品。
2、超净台反方观点:
部分人认为超净工作台里不需要放置酒精灯,大致会有如下一些观点:
现在绝大多数细胞培养使用的试剂瓶子,都是塑料制品,经不起灼烧,短暂的过火达不到高温,肯定没有局部消毒的效果,更别说灭菌了;超净台内的气流本来就应该是无菌的,酒精灯的热气流会干扰通风的流动,反而影响超净台本身的层流除菌除尘效果;所谓酒精灯周围是无菌区,是在没有超净台的时候,灼烧能产生上升气流,防止灰尘落入瓶口,但有超净台的时候就没有必要;在正常情况下,快速操作比在酒精灯附近无菌区磨蹭效果更佳;使用酒精灯增加了火灾的隐患。
二、安全柜里能不能用酒精灯
我们来看CDC关于生物安全柜的译文如下:在生物安全柜几乎没有微生物的环境中,明火是不需要的。在开放的操作台上(BSC之外),通过灼烧培养瓶口,可以创造一个向上的气流,预防携带微生物的尘埃坠落入试管或培养瓶。
而在一个生物安全柜中,明火产生扰动气流,破坏了供向操作台面的洁净空气的流向。如果真的确实需要明火,可以使用装备控制火焰大小的微型灯具。这样,柜内空气扰动和加热效应会减少到Z低。需要火焰的操作结束后,必须关闭灯具。另外,相对于在生物安全柜内使用明火,更好的选择是使用电气化的“熔炉”来消毒接种环和接种针。一次性的无菌环也是一个选择。
1、快速过火是不可能杀灭细菌的,过火的目的是为了固定住细菌防止扩散,火焰的温度能够使气流形成负压,在酒精灯周围10cm处形成一个无菌区,操作在此范围内进行为好。
2、一些器械,包括镊子,剪刀,接种环,滴管尖端都可以采取火焰灼烤的灭菌方法。但是要烧烤足够长的时间,并且接触组织时要充分冷却。
3、在正常情况下,快速操作比在酒精灯附近磨蹭无菌效率更高。
三、结论
超净工作台内可放酒精灯。首先,超净台内的净化空气是从上面往下吹,它的热量可以形成对流,可以在局部形成无菌区预防微生物感染。其次,酒精灯的消毒作用也是不能忽视的:做实验时将培养瓶内的培养液或其它液体倒掉时,瓶口难免会有一些细胞,可以在酒精灯外焰上过几下,产生的高温可以消灭细胞,避免细胞交叉污染;装培养液和各种液体的瓶子口受污染的几率也是很大的,在火焰上消一下毒也能预防污染啊;超净台内的用过的吸管进行消毒也是必要的,因为紫外线不能100%的消灭微生物。不能单纯的看国外用不用酒精灯,就机械的去学习。因为国外细胞室是很干净的,洁净度很高,尘粒很少,净化台质量又好,有独立的通风系统而且细胞室内是正压,空气是只能从细胞室往外跑,而外面的空气进不来,他们污染的几率很低,用不着使用酒精灯,而国内,我们自问真正符合标准的细胞室有几个,我们的空气里的灰尘也比国外多得多,酒精灯还是有很多好处的,总之,还是不要去掉酒精灯得好。
生物安全柜和超净台不是同一事物。超净台出现教早,是为了保护样品免受操作过程污染。其中的气体未经处理直接派出,不能保护工作人员的安全,而生物安全柜是设计用以保护操作者、实验室环境及实验材料避免接触在操作原始培养物、菌毒株及诊断标本等具有传染性的实验材料时可能产生的传染性气溶胶和溅出物。
生物安全柜和超净台是两个不同的概念。超净台是不能和生物安全柜比的,这么简单的超净台根本做不到无菌的环境(可以说是个开放的空间),所以超净台内用酒精灯还是有必要的。
细事实上,酒精灯还是有帮助消毒的效果的,表现在:
1、经过酒精灯加热的器皿口会有上升气流,这样从瓶口掉落微生物进入瓶内的概率下降了,有人担心上升气流引起周围空气向瓶口流动带来更多微生物,其实不会如此,这是因为周围的气流不会流经瓶口(瓶口气流上升),所以其中微生物是不会进入瓶内的。开瓶之前先把口烧热,开瓶后污染就少得多。
2、固定或杀死细菌/细胞,有人可能不太理解固定的意思,其实在实验室细菌自己是不会跑的(跑得太慢了),所以细菌的移动不是随着气流,就随着液流,我们适当灼烧瓶口等有液流的地方,使其干燥,就减少了细菌或细胞随液流扩散的可能性,这就是有用的。
3、必要的消毒措施,细胞培养室往往是多功能的,有时要做原代,动物或其内脏要进来,有些手术器械,适当灼烧可以避免污染。有些实验室条件不好,就更是必要了,吸管之类东西如果不是一次性,对高压灭菌又不是很有信心,那么烧一烧是少不了的。那么为什么国外有些实验室不用呢?楼主发的照片其实就能回答了,大家回头浏览一下,他们超净台是不是都有很多东西?当东西太多的时候,酒精灯就是一个危险因素了,容易伤人,失火的可能性也很高。而且具我所知,国外很多实验室实际上也有类似的东西一般是煤气喷灯或者电热灼烧器,可以在方便的时候灼烧。