二氧化碳培养的灭菌方式有多种，以下是几种常见的灭菌方法：

1、紫外灭菌

通过紫外线灯管发出特定波长（一般主要是 253.7nm 左右）的紫外线，紫外线照射到微生物的 DNA 等遗传物质上，使其结构被破坏，导致微生物无法正常繁殖、生长进而死亡。可在培养箱内部安装紫外线灯，在箱内无物品或者定期对空箱进行照射操作，通常照射一段时间（比如 30 分钟至数小时不等）来实现灭菌效果。不过紫外线的穿透力相对较弱，只能对其直接照射到的物体表面进行灭菌，对于一些存在遮挡、缝隙等部位的灭菌效果有限，且灯管随着使用时间增长，紫外线强度会逐渐减弱，需要定期更换灯管以保证灭菌效果。

2、过滤除菌

在二氧化碳培养箱进气和排气等部位安装高效空气过滤器（HEPA 过滤器等），过滤器的滤材能够拦截、吸附空气中的微生物、灰尘颗粒等，使得进入培养箱内部的空气以及排出的气体都是经过净化处理的，保证培养箱内部气体环境相对无菌。不过过滤器需要定期更换，以维持良好的过滤效果，防止随着使用时间增加，因滤材堵塞、破损等情况而导致除菌效果下降。

3、干热灭菌

采用6面直接加热，加热温度一般在120℃-180℃。当二氧化碳培养箱用于污染危险区域时，干热灭菌可作为清洁室内的附加手段。在高温下保持2小时以上可消灭细菌，但整个过程时间长，且干热140℃时仍可能存在灭菌不彻底的情况，部分芽孢和孢子可能无法灭活。

4、湿热灭菌

温度超过100℃后水转变为水蒸汽并产生高压强，对微生物进行高压及穿透性导热灭菌。但二氧化碳培养箱通常采用90℃湿热灭菌，因温度过低，无法达到理想的灭菌效果，对芽孢、孢子等耐高温类污染无效。

5、高压灭菌法

通过将二氧化碳培养箱置于密闭容器中加压至一定压力（如120~130磅/英寸²），并持续一定时间（如20分钟以上）来实现灭菌效果。高压下产生的温度和压力可彻底摧毁几乎所有微生物及其孢子形式。然而，由于二氧化碳培养箱的结构和材质限制，高压灭菌法通常不适用于该设备的灭菌。

6、化学灭菌

（1）液体消毒剂：选择对二氧化碳培养箱无腐蚀性的液体消毒液，如含氯消毒剂、过氧化物类消毒剂、醛类消毒剂、醇类消毒剂等，对物体表面进行快速消毒，属于表层杀菌，效率高、时间短、操作便捷，但消毒不彻底，并且对人体有害，有腐蚀性，无法杀死病菌或者细菌芽孢。

（2）甲醛熏蒸：通过将一定浓度的甲醛溶液喷洒或雾化到二氧化碳培养箱内部，达到杀灭微生物的目的。甲醛能与蛋白质分子共价结合形成稳定的交联结构，从而导致微生物死亡。该措施尤其适用于杀死空气传播的病原体。然而，甲醛具有刺激性气味和毒性，使用时需要严格控制浓度和作用时间，并确保充分通风。

（3）环氧乙烷熏蒸：环氧乙烷是一种广谱杀菌剂，能够穿透微生物细胞膜并干扰其代谢过程，从而杀灭细菌、真菌和病毒等多种类型的微生物。这种灭菌方式效果显著，但操作过程较为复杂，且环氧乙烷具有毒性，需要在专业人员的指导下进行。

（4）过氧化氢蒸汽灭菌：将过氧化氢气体与水混合后产生蒸汽，然后将其导入二氧化碳培养箱中进行灭菌处理。过氧化氢分解产生氧气和水，同时释放大量活性氧自由基，这些物质能够有效地破坏细胞壁和DNA结构，从而达到灭菌目的。

为了达到更好的灭菌效果，有时可以采用联合杀菌法，即同时使用多种灭菌方式。例如，可以先用紫外线照射或液体消毒剂进行初步灭菌，然后再用环氧乙烷或过氧化氢蒸汽进行深度灭菌。这种方式可以弥补单一灭菌方式的不足，提高灭菌效果。选择哪种灭菌方式取决于具体的灭菌需求和设备条件。在使用任何灭菌方式之前，都需要仔细阅读设备说明书并咨询专业人员的意见。