细胞培养是一项精细且需严格操作的实验技术，需全面考虑各个环节，以确保细胞健康生长与实验顺利进行。以下是从不同方面给出的注意事项：

一、实验环境与器材

1、环境清洁：细胞培养需在无菌环境下进行，常用设备如超净工作台需在使用前用紫外线照射30分钟以上以杀灭微生物。同时，定期清洁培养箱，防止污染。

2、器材灭菌：玻璃器皿、金属器械等可采用高压蒸汽灭菌，塑料制品则多选择环氧乙烷灭菌或购买已灭菌产品。使用前需确保器材干燥，避免残留水分影响细胞生长。

二、细胞来源与处理

1、细胞选择：根据实验目的挑选合适细胞系，确保细胞来源可靠、无污染。

2、细胞复苏：从液氮罐中取出冻存细胞后，应迅速放入37℃水浴中快速解冻，减少冰晶对细胞的损伤。解冻后及时将细胞转移至含培养液的离心管中，低速离心去除冻存液，再用新鲜培养液重悬并接种到培养瓶。

三、培养过程操作

1、细胞传代：当细胞生长至对数生长期且汇合度达到80%~90%时需及时传代。传代时，先用胰蛋白酶等消化液处理细胞，使其从培养瓶壁脱落，再加入含血清培养液终止消化，吹打均匀后按合适比例接种到新培养瓶。

2、无菌操作：进入细胞培养室前，实验人员需更换工作服、鞋套，戴口罩、手套。操作时，尽量减少在超净工作台内的动作幅度，避免引起空气流动造成污染。

3、试剂使用：所用培养液、血清、缓冲液等试剂应无菌、无污染，使用前需进行无菌检测。不同细胞对培养液成分要求有差异，应按细胞类型选择合适培养液，并添加适量血清提供营养与生长因子。同时，注意试剂保存条件与有效期，避免使用过期试剂。

四、培养条件把控

1、温度：多数哺乳动物细胞适宜培养温度为37℃，偏差应控制在±0.5℃。培养箱温度控制系统需定期校准，确保温度稳定。

2、气体环境：细胞培养通常需5%CO2，用于维持培养液pH值稳定。培养箱应保持良好密封性，定期检查气体浓度与流量。

3、湿度：培养箱内湿度应保持在95%左右，可通过在培养箱内放置无菌水盘实现，需定期更换水盘内的水，防止微生物滋生。

五、日常观察与定期检测

1、日常观察：每天在显微镜下观察细胞形态、生长状态与培养液颜色变化。健康细胞形态规则、透明度好、折光性强。培养液颜色可反映pH值变化，若变黄可能因细胞代谢产酸过多，变红则可能因细胞生长缓慢或死亡。

2、定期检测：定期对细胞进行支原体、细菌、真菌等污染检测。可采用PCR、培养法等检测方法，若发现污染，应及时处理，防止污染扩散。

细胞培养需要注意多个方面，包括实验环境与器材、细胞培养环境、培养基的选择与更换、细胞观察与传代、无菌操作与污染控制等。只有掌握了这些技巧并严格遵守相关规范，才能成功培养出健康、稳定的细胞系。