二氧化碳培养箱内细胞生长不良可能由多种因素引起，需从环境、操作和设备等方面逐一排查。以下是可能的原因及解决方法：

一、检查CO₂浓度

1、问题：CO₂浓度不稳定或偏离设定值（通常为5%）。

2、解决方法：

使用外置CO₂检测仪校准培养箱的CO₂传感器。

检查气源是否充足，气体管路是否漏气。

确保培养箱门关闭严密，避免CO₂泄漏。

二、检查温度和稳定性

1、问题：温度波动或偏离设定值（通常为37℃）。

2、解决方法：

使用外置温度计校准培养箱温度传感器。

检查加热元件和控制系统是否正常工作。

避免频繁开门，减少温度波动。

三、检查湿度

1、问题：湿度过低可能导致培养基蒸发，影响细胞生长。

2、解决方法：

确保培养箱内的水盘中有足够的无菌水。

检查湿度传感器是否正常工作。

定期清洁水盘，防止污染。

四、检查培养基

1、问题：培养基成分不合适或已变质。

2、解决方法：

确认培养基配方适合细胞类型。

检查培养基是否过期或储存不当。

确保培养基的pH值在7.2-7.4之间（CO₂培养箱中碳酸氢盐缓冲系统依赖CO₂浓度）。

五、检查细胞状态

1、问题：细胞本身状态不佳或传代操作不当。

解决方法：

检查细胞是否污染（细菌、真菌、支原体等）。

确认细胞传代比例和操作规范。

使用新鲜的细胞株或冻存细胞。

六、检查污染

1、问题：培养箱或细胞可能被污染。

2、解决方法：

定期清洁和消毒培养箱内部。

使用抗生素（如青霉素/链霉素）防止细菌污染。

检查培养箱水盘和密封条是否清洁。

七、检查氧气浓度

1、问题：某些细胞对氧气浓度。

2、解决方法：

如果需要，调整培养箱的氧气浓度（如使用三气培养箱）。

确保培养箱通风良好，避免氧气浓度过低。

八、检查设备运行状态

1、问题：培养箱设备故障。

2、解决方法：

检查CO₂传感器、温度传感器、湿度传感器是否正常工作。

联系设备供应商或技术支持进行维修或校准。

九、优化实验操作

1、问题：操作不当导致细胞生长不良。

2、解决方法：

减少培养箱开门时间和频率。

确保细胞接种密度合适。

使用高质量的耗材（如培养瓶、培养皿）。

十、记录与监控

1、问题：无法追踪问题来源。

2、解决方法：

记录每次实验的详细参数（CO₂浓度、温度、湿度、细胞状态等）。

使用数据记录仪监控培养箱环境稳定性。

细胞生长不良可能由单一或多个因素引起，需系统排查。如果问题持续，建议：使用已知健康的细胞株作为对照；联系设备供应商或技术支持进行设备检查；咨询实验室同事或相关领域专家。通过以上步骤，通常可以找到问题根源并解决细胞生长不良的情况。