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PCR 仪器有多种分类方法,具体如下:
一、根据 DNA 扩增的目的和检测标准分类
1、普通 PCR 仪:一次 PCR 扩增只能运行一个特定退火温度,主要用于简单的、对目的基因退火温度的扩增,应用于科学研究、教学、医学临床、检验检疫等机构。
2、梯度 PCR 仪:一次性 PCR 扩增可设置一系列不同的退火温度条件,通常有 12 种温度梯度,用于研究未知 DNA 退火温度的扩增,可节约成本和时间,也可在不设置梯度时当作普通 PCR 仪使用,多应用于科研、教学机构。
3、原位 PCR 仪:用于从细胞内靶 DNA 的定位分析,可保持细胞或组织的完整性,使 PCR 反应体系渗透到组织和细胞中,在细胞的靶 DNA 所在位置进行基因扩增,对于在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理、临床过程及病理转变有重大实用价值,主要应用于临床、科研领域。
4、实时荧光定量 PCR 仪:在普通 PCR 仪基础上增加了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,PCR 扩增时加入的引物利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增,扩增结果通过荧光信号采集系统实时采集信号并输送到计算机分析处理系统,得出量化的实时结果输出,主要用于医学临床检测、生物医药研发、食品行业、科研院校等机构。
二、根据 DNA 扩增时升温介质分类
1、变温铝块式 PCR 仪:以电阻丝、导电热膜、热泵式珀尔帖半导体元件等为热源,通过升温带有凹孔的铝块,利用自来水、制冷压缩机或半导体来降温。优点是温度传导快,各管扩增一致性好;缺点是压缩机制冷重量大、启动慢等。
2、水浴式 PCR 仪:以水为传热介质,通过机械装置将带有反应管的架子在 3 个不同温度的水浴中移位和升降温度,实现温度循环。优点是温度易恒定,热容量大,扩增效果稳定;缺点是高温水浴不稳定,改变水浴温度耗时较长。
3、变温式流式 PCR 仪:依据空气流的动力学原理,以冷热气流为介质升降温度。优点是变温迅速,适合微量、快速 PCR,反应器不受形状限制;缺点是难以控制低温,有较多空气流动力学要求。
三、根据实时荧光定量 PCR 仪的结构分类
1、金属板式实时定量 PCR 仪:可作为普通 PCR 仪使用,部分带梯度功能,能容纳的样本量大,无需特殊耗材,但温度均一性欠佳,存在边缘效应,标准曲线的反应条件难以与样品完全一致。
2、离心式实时定量 PCR 仪:PCR 扩增样品槽被设计为离心转子,温度均一性好,使用同一个激发光源和检测器,可随时检测旋转到跟前的样品,能有效减少系统误差,但可容纳样品量少,有的需用特殊毛细管作样品管,增加了使用成本,且不带梯度功能。
3、各孔独立控温的定量 PCR 仪:不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块,各孔独立控温,适合多指标快速检测,可实现任意梯度反应,但上样不如传统方法方便,且需要特殊的扁平反应管,使用成本较高。
PCR仪器种类多样,选择时需根据实验需求、通量和预算进行权衡。
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