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PCR仪的原理是什么?
2025-03-19 10:32:42 作者: 高思维医疗 990

PCR仪(聚合酶链式反应仪,Polymerase Chain Reaction Machine)的工作原理基于DNA复制的自然过程,通过模拟DNA复制的关键步骤,在体外快速扩增特定的DNA片段。以下是PCR仪工作原理的详细解释:


一、基本步骤原理

1、变性:

将反应体系加热到 90℃-95℃左右,此时双链 DNA 分子的氢键断裂,两条互补链解开成为单链 DNA,便于后续以单链为模板进行新链合成。例如,常见的基因组 DNA 经过这一高温处理后,原本的双链结构会被打开,形成单链状态。

2、退火:

温度降低至 50℃-65℃左右,根据引物(人工合成的短链 DNA 片段,能与目标 DNA 序列两端特异性结合)的碱基组成和长度等因素确定具体温度。在这个温度下,引物可以按照碱基互补配对原则,结合到单链 DNA 模板上与之互补的特定区域,为后续 DNA 新链的合成确定起始位置。

3、延伸:

温度升高到 70℃-75℃左右,这个温度是 DNA 聚合酶的Z适作用温度,在 DNA 聚合酶(常用的如 Taq DNA 聚合酶等,它具有热稳定性,能耐受高温变性步骤的反复加热)的催化作用下,以单链 DNA 为模板,以 dNTP(脱氧核苷三磷酸,是合成 DNA 的原料)为底物,按照碱基互补配对原则,从引物的 3’端开始逐个添加脱氧核苷酸,合成与模板链互补的新 DNA 链。


二、循环扩增

经过变性、退火、延伸这一循环后,DNA 的量实现了一定程度的增加,一条双链 DNA 经过一轮循环后变成了两条双链 DNA。然后不断重复上述三个步骤,每循环一次,DNA 的数量就会以指数形式增长,经过几十次循环后,就可以获得大量的目标 DNA 片段,便于后续进行检测、分析等操作。、


总之,PCR 仪通过精确控制温度变化,按照设定好的程序让反应体系反复经历变性、退火、延伸的循环过程,实现对特定 DNA 片段的体外大量扩增。

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