一、荧光定量PCR检测方法主要有4种，如下：

1、DNA结合染料法：应用一种带有荧光的、非特异的DNA结合染料检测PCR过程中积累的扩增产物。一般使用的是SYBR Green I染料，这是一种可以与双链DNA小沟结合的荧光染料，不会与单链DNA结合，并且在游离状态下几乎无荧光，只有与双链DNA结合才会发出荧光，因此将PCR扩增产生的双链DNA数量与荧光强度直接关联，产生实时监测的效果。

2、基于探针的化学法：应用一个或多个荧光标记的寡核苷酸探针检测PCR扩增产物；依赖荧光能量共振传递检测特异性扩增产物。这是应用于核酸定量、基因表达验证、等位基因鉴别、SNP分型、病原体和病毒检测、多重PCR。基于探针的化学法的优点是探针法的鉴别能力远远大于DNA结合染料法，因为它们只与目的产物结合，从不与引物二聚体或其他非特异产物结合，缺点是它的合成价格高。

3、绝对定量：绝对定量是用己知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。

4、相对定量：相对定量一般是采用参照内参基因，通过对比内参基因判断特定样本中目的基因基因表达量上调或下降的倍数。该方法要求内参基因和目的基因具有相同的扩增效率，并尽可能接近100%。

这些就是荧光定量PCR的主要检测方法。

二、荧光定量PCR应用环境有哪几种？

荧光定量PCR技术具有高灵敏度、快速、准确、可靠、重复性好等优点，因此广泛应用于生命科学、医学、环境监测、食品安全等领域。

1、医学领域：荧光定量PCR被用于病毒感染、癌症诊断等方面。例如，通过荧光定量PCR技术，可以检测血液或其他生物样品中是否存在特定的病毒或癌细胞。

2、生物学领域：荧光定量PCR被用于基因表达、基因型鉴定等方面。例如，通过荧光定量PCR，可以测量特定基因在不同组织或不同生长条件下的表达水平，或者鉴定生物体的基因型。

3、环境科学领域：荧光定量PCR被用于水质检测、土壤污染等方面。例如，通过荧光定量PCR，可以检测水样中是否存在特定的污染物，或者测量土壤中某种污染物的浓度。