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酶联免疫法是目前很常用的免疫学方法,实验室标准化要求用酶联免疫法测定抗原或抗体时,不论是定量还是定性都要求使用酶标测定仪进行测定,测定时需要选择单波长或双波长。那酶标测定仪单波长和双波长怎么选择?
选择单波长测定就是选择一个测定波长,直接测定样本的吸光度,而双波长测量是采用两个不同的波长,即测定波长(又叫主波长)和参比波长(又叫次波长)同时测定样品的吸光度,以消除一些外在影响因素,提高测定结果的精密度和准确度,但在日常工作中往往忽略对单波长和双波长的选择。
酶标测定仪利用光电比色原理,与酶免试剂配套使用,可用于临床实验室检测样本吸光度,进行酶联免疫学相关分析。
1.具有吸光度、定性、定量分析功能。
2.具有单、双波长和单、双孔两种检测方式供用户选择。
3.全中文界面,人机对话方式的菜单操作系统,操作简单。
4.报告方式:
定性:样本吸光度、S/CO值、临界值及阴阳性判定结果;
定量:样本吸光度、样本浓度值、正常参考值及检测判定结果。
5.输出为96孔整板检验结果。
酶标测定仪波长比较:
酶标测定仪在用单波长测定吸光度时,除受到测定干扰(样本的浊度、干扰色等)和电路干扰(包括噪音、漂移、电压等)等因素外,受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中,由于液体表面张力的作用,液体的表面不是一个平面,而是形成一个凹面,从侧面看似凹透镜,这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响,光线在通过液体时,除正常被液体吸收一部分外,尚有部分被折射和反射(如光线通过凹透镜那样),影响吸光度的检测。而酶标测定仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源,如果每次能在同一部位检测,吸光度的重复性将得到保证,但由于机械运动等造成的误差,不可能保证每孔都在相同部位被检测,因此造成了孔与孔之间有一定的差异。
双波长的测定采用两个不同的波长同时测定一个样本的吸光度,它们的差值是样本相对准确的吸光度,这样就大大减少了测定干扰和电路干扰,因此测定结果明显好转。
在酶联免疫法测定抗原、抗体时,常用的底物四甲基苯胺或邻苯二胺,显色终止后,在630nm处的吸光度值都只有在450nm处吸光度值1%左右,因此利用双波长检测不会影响灵敏度,反而可以减少其他因素的影响。建议酶联免疫法比色首选双波长,这样可以提高临界值附近标本结果判定的准确度,减少实验误差。
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