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一、PCR
1、PCR全称为Polymerase Chain Reaction,即聚合酶链式反应,是一种分子生物学技术,通过特定的酶促反应在体外将微量的DNA片段进行指数级扩增。利用DNA在高温下变性成单链,低温下引物与单链DNA互补配对结合,再在DNA聚合酶的作用下,以dNTP为原料,按照碱基互补配对原则合成新的DNA链。这一过程通过反复循环,使目的DNA片段得到大量扩增。
2、PCR:目的是扩增目的DNA片段,得到DNA产物。后续一般会跑琼脂糖凝胶电泳进行纯化,或者进行酶切酶连等分子生物学实验。
3、PCR(Polymerase Chain Reaction)
(1)目的:扩增特定的DNA序列。
(2)原理:利用DNA聚合酶在特定温度下复制DNA片段。
(3)应用:基因克隆、DNA指纹图谱、病原体检测等。
二、RT-qPCR
1、全称实时逆转录定量聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Quantitative PCR),是一种结合了逆转录PCR(RT-PCR)和实时定量PCR(qPCR)技术的分子生物学方法。该技术主要用于检测和定量RNA分子的表达水平,广泛应用于基因表达分析、病毒载量检测、疾病研究等多个领域。
2、RT-qPCR:目的是对某个mRNA进行定量测定。RT指的是Reverse Transcription,先把细胞里提的RNA逆转录为cDNA。q指的是Quantitative,指在PCR的基础上加入荧光标记探针或染料,实时监测每个循环中扩增的DNA量。跑完一般把样品直接扔掉,分析数据计算目的基因的表达量。
3、RT-qPCR(Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction)
(1)目的:定量分析RNA序列的表达水平。
(2)原理:结合了RT-PCR和qPCR的技术,先逆转录为cDNA,然后进行实时定量PCR。
(3)技术:使用SYBR Green染料或TaqMan探针等,实时监测cDNA的扩增。
(4)应用:miRNA表达分析、病原体RNA定量等。
三、qPCR
1、qPCR,全称为定量聚合酶链式反应(Quantitative Polymerase Chain Reaction),是一种用于测量特定DNA序列数量的分子生物学技术。它利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增过程中每一个循环扩增产物量的变化,并进行定量分析。qPCR技术在生物医学研究、病原体检测、遗传变异研究、环境监测以及临床诊断等多个领域具有广泛的应用价值。
2、qPCR(Quantitative Polymerase Chain Reaction)
(1)目的:定量分析DNA拷贝数。
(2)原理:在PCR基础上加入荧光探针或染料,实时监测每个循环中扩增的DNA量。
(3)技术:使用SYBR Green染料或TaqMan探针等。
(4)应用:基因表达分析、病原体定量、遗传突变检测。
四、RT-PCR
1、RT-PCR,全称为逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction),是一种将RNA的反转录(RT)与DNA的聚合酶链式反应(PCR)相结合的技术。该技术允许研究人员从RNA样本中生成cDNA,进而通过PCR扩增这些cDNA,以便进行分析或检测。
2、RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)
(1)目的:从RNA模板扩增cDNA。
(2)原理:首先使用逆转录酶将RNA转录为cDNA,利用DNA聚合酶进行PCR扩增。
(3)应用:检测特定mRNA的表达、基因表达分析等。
PCR和qPCR通常用于DNA的分析,而RT-PCR和RT-qPCR则用于RNA的分析。